綠色熒光蛋白是一類存在于腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白。GFP具有多種優(yōu)點(diǎn)：易于檢測，靈敏度高;熒光性質(zhì)穩(wěn)定，耐受性強(qiáng);易于表達(dá)，無細(xì)胞毒性;可用于活細(xì)胞檢測。
因此，GFP可作為報(bào)告基因用于檢測基因表達(dá)或調(diào)控，或作為融合標(biāo)簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位、遷移、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用，或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器。
GFP吸收的光譜最大峰值為395nm(紫外)，并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍(lán)光);發(fā)射光譜最大峰值為509nm(綠光)，并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder)。
雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發(fā)光對細(xì)胞的傷害更小，因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。
此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強(qiáng)，特別是在450～490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定。
類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高，抗光漂白能力強(qiáng)，因此更適用于定量測定與分析。
由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報(bào)告蛋白，其作用是任何其它酶類報(bào)告蛋白無法比的。
但因?yàn)镚FP不是酶，熒光信號沒有酶學(xué)放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報(bào)告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。
觀察GFP熒光蛋白方法有：
采用熒光蛋白觀測燈是便捷、方便的觀察方法，因GFP在470nm有一個很高的吸收峰，采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光，在觀察gfp熒光時(shí)，因?yàn)榧ぐl(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線，必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。
2. 紫外光源：
采用紫外光源(又叫紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便，但如果觀察植物，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光，對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾，另外，標(biāo)本長時(shí)間在紫外光源照射下對GFP標(biāo)本組織也會造成破壞。
3.熒光顯微鏡
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ： 熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光;
另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實(shí)驗(yàn)室非常普及，但不足是必須采集葉片或動物切片進(jìn)行觀察，對培養(yǎng)的標(biāo)本進(jìn)行破壞，無法進(jìn)行活體觀察。
